ELISA试剂盒的操作方法【白介素elisa试剂盒】

 酶联免疫(yi)吸附测定(ding)enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）,指(zhi)将(jiang)可(ke)溶性(xing)的(de)抗(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)体(ti)结合(he)到聚苯乙烯等固相载体(ti)上,利(li)用抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)体(ti)结合(he)专一(yi)性(xing)进行免疫(yi)反应的(de)定(ding)性(xing)和定(ding)量(liang)检测方法.要知道elisa操作步骤首先我们先了解一(yi)下elisa的(de)原理是什么.

elisa的原理：

①使抗原或抗体结(jie)合到(dao)某(mou)种固相(xiang)载体表面,并保(bao)持其(qi)免疫活性.

②使抗(kang)(kang)原或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)体(ti)(ti)与(yu)(yu)某种酶(mei)(mei)连接(jie)成酶(mei)(mei)标(biao)(biao)抗(kang)(kang)原或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)体(ti)(ti),这种酶(mei)(mei)标(biao)(biao)抗(kang)(kang)原或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)体(ti)(ti)既保留其免(mian)疫活性, 又(you)保留酶(mei)(mei)的活性.在测定时,把受检标(biao)(biao)本(ben)（测定其中的抗(kang)(kang)体(ti)(ti)或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)原）和酶(mei)(mei)标(biao)(biao)抗(kang)(kang)原或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)体(ti)(ti)按不同的步骤与(yu)(yu)固(gu)相(xiang)载体(ti)(ti)表面的抗(kang)(kang)原或(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)体(ti)(ti)起(qi)反(fan)(fan)应(ying).用(yong)洗涤的方法使固(gu)相(xiang)载体(ti)(ti) 上形成的抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)体(ti)(ti)复合物(wu)(wu)(wu)与(yu)(yu)其他物(wu)(wu)(wu)质分开,*后(hou)结合在固(gu)相(xiang)载体(ti)(ti)上的酶(mei)(mei)量(liang)(liang)(liang)(liang)与(yu)(yu)标(biao)(biao)本(ben)中受检物(wu)(wu)(wu)质的量(liang)(liang)(liang)(liang)成一定的比例.加入酶(mei)(mei)反(fan)(fan)应(ying)的底物(wu)(wu)(wu)后(hou),底物(wu)(wu)(wu)被(bei)酶(mei)(mei)催化(hua)变为有色产物(wu)(wu)(wu), 产物(wu)(wu)(wu)的量(liang)(liang)(liang)(liang)与(yu)(yu)标(biao)(biao)本(ben)中受检物(wu)(wu)(wu)质的量(liang)(liang)(liang)(liang)直接(jie)相(xiang)关,故(gu)可(ke)根据(ju)焰色反(fan)(fan)应(ying)的深浅刊物(wu)(wu)(wu)定性或(huo)(huo)(huo)定量(liang)(liang)(liang)(liang)分析.由于酶(mei)(mei)的催化(hua)效率很高,故(gu)可(ke)地(di)放大反(fan)(fan)应(ying)效果,从而使测定方法达到(dao) 很高的敏感度.

elisa操(cao)作步骤(zhou)：

方法一　用于检测未知抗(kang)原的双抗(kang)体(ti)夹心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液(ye)将抗体稀(xi)释至蛋(dan)白(bai)质含量为1～10μg/ml.在每个聚苯乙烯板的反应孔中(zhong)加0.1ml,4℃过夜.次日,弃去孔内溶液(ye),用洗(xi)涤缓冲液(ye)洗(xi)3次,每次3分钟.（简称(cheng)洗(xi)涤,下同）.

2.　加(jia)样(yang)：加(jia)一定稀释的待检样(yang)品0.1ml于上述已包被之反应孔(kong)(kong)中,置(zhi)37℃孵育1小时(shi).然后(hou)洗涤.（同(tong)时(shi)做空白孔(kong)(kong),阴性(xing)对照(zhao)孔(kong)(kong)及阳性(xing)对照(zhao)孔(kong)(kong)）.

3.　加酶标抗体(ti)：于(yu)各反应(ying)孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(ti)（经滴定后的稀释度(du)）0.1ml.37℃孵育0.5～1小时,洗涤.

4.　加底(di)物(wu)液(ye)显色：于各反应孔中加入临时(shi)配制的TMB底(di)物(wu)溶液(ye)0.1ml,37℃10～30分钟.

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸(suan)0.05ml.

6.　结(jie)果判定(ding)：可于白(bai)色背景上,直接(jie)用肉眼观察结(jie)果：反(fan)应孔内(nei)颜(yan)色越深,阳(yang)性程度越 强,阴性反(fan)应为无色或(huo)浅,依据(ju)所呈颜(yan)色的(de)(de)深浅,以“+” “-”号表示.也(ye)可测(ce)O·D值：在ELISA检测(ce)仪上,于450nm（若以ABTS显色,则 410nm）处,以空白(bai)对(dui)照孔调零后测(ce)各孔O·D值,若大于规定(ding)的(de)(de)阴性对(dui)照OD值的(de)(de)2.1倍,即为阳(yang)性.

方法(fa)二　用于检测(ce)未知抗体的间接法(fa)：

用包被(bei)缓冲液将(jiang)已知抗原稀释至1～10μg/ml,每孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)0.1ml,4℃过夜(ye).次日(ri) 洗涤(di)3次.加(jia)(jia)一(yi)定稀释的(de)待(dai)检(jian)样品（未知抗体(ti)）0.1ml于(yu)上(shang)述(shu)已包被(bei)之反(fan)应孔(kong)(kong)(kong)中(zhong),置37℃孵(fu)育(yu)1小时,洗涤(di).（同时做空白 阴性及阳性孔(kong)(kong)(kong)对照(zhao)）于(yu)反(fan)应孔(kong)(kong)(kong) 中(zhong),加(jia)(jia)入(ru)新鲜稀释的(de)酶标二(er)抗体(ti)（抗抗体(ti)）0.1ml,37℃孵(fu)育(yu)30-60分钟,洗涤(di),*后一(yi)遍用DDW洗涤(di).其余步骤同“双抗体(ti)

以上是elisa操(cao)(cao)作步骤,那么(me)在elisa操(cao)(cao)作步骤的操(cao)(cao)作步骤中(zhong)需要(yao)注意什么(me)呢？下面是elisa实验的注意事项：

1.正式(shi)试(shi)验时,应分(fen)别以阳性(xing)(xing)对照与阴(yin)性(xing)(xing)对照控制试(shi)验条件,待检样品(pin)应作一式(shi)二份,以保证实验结果的(de)准确性(xing)(xing).有时本底较高(gao),说明有非特异性(xing)(xing)反(fan)应,可(ke)采用(yong)羊(yang)血(xue)(xue)清 兔(tu)血(xue)(xue)清或BSA等封(feng)闭.

2.在elisa操(cao)作(zuo)步(bu)骤中,进行(xing)各项实验条件的(de)选(xuan)择(ze)(ze)(ze)是很重要的(de),其中包括：固(gu)相载体(ti)的(de)选(xuan)择(ze)(ze)(ze) 包被抗(kang)体(ti)（或抗(kang)原）的(de)选(xuan)择(ze)(ze)(ze) 酶(mei)标记抗(kang)体(ti)工作(zuo)浓度的(de)选(xuan)择(ze)(ze)(ze) 酶(mei)的(de)底(di)物及(ji)供(gong)氢体(ti)的(de)选(xuan)择(ze)(ze)(ze)

黄石(shi)研科生物科技有限公司会定期发(fa)布新品(pin)推荐和(he)产品(pin)规格参数(shu).公司主(zhu)要(yao)经营：   等(deng)产品(pin).欢迎(ying)来(lai)电咨询产品(pin),新闻(wen)转(zhuan)自网(wang)络,如(ru)果有内(nei)容侵权请联系本公司,会及时做(zuo)出删除处理,谢谢！